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养殖场用非洲猪瘟检测试剂盒使用时应该注意什么

  • 发布日期:2021-03-30      浏览次数:54
    • 养殖场用非洲猪瘟检测试剂盒使用时应该注意什么?【竞道厂家发布】How to use African classical swine fever detection kit for farms 型号:JD-ZWSJ2

       

        试剂盒组成及贮藏条件

        名称20 T50 T

        1、吸附柱20个50个

        2、收集管20个50个

        3、裂解液5 mL11 mL

        4、洗液I13 mL32 mL

        5,洗液II13 mL32 mL

        6.洗脱液1.2 mL3 mL

        2、 保存条件及有效期:室温下保存,有效期12个月.

        3、 需自备材料:无水乙醇、1.5 mL无菌离心管、1.5 mL无菌离心管(长臂型)、生理盐水、研钵、无菌

        1mL, 2OOuL、10uL枪头、记号笔等。

        【操作步骤】

        一、样品制备

        1、 血液样品:抗凝血样品置离心管中,8000转/分钟离心2分钟,取上层血浆;非抗凝血样品置离心 管中,待凝固后,8000转/分钟离心2分钟,取上层血清,置于灭菌离心管中,编号待检。

        2、 组织样品:采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品0.1g.组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨,加入1 mL生理盐水混匀,8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心骨中,编号待检。

        3、 口腔液:进食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉线绑纱布团吸引动物咀嚼,收集口腔液大于 500uL, 8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心管中,编号待检。

        4、 饲料:取适量研磨后的饲料(约0.2g),放入含1 mL生理盐水或PBS(PH为7.4)缓冲液的2 mL EP 管屮,振荡混匀,8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心管中,编号待检.

        5、 灰尘:用无菌棉签蘸取适量环境表面上的灰尘,放入含1 mL生理盐水或PBS(PH为7.4)缓冲液的2 mL EP管中,振荡混匀,8000转/分钟离心2分钟,取上清于灭菌离心管中,编号待检。

        二、DNA的提取

        1、取裂解液200uL加入无核酸酶1.5 mL离心曾屮,分别加入血浆/血清/组织液等样品液200uL. 震荡混匀10秒或颠倒混匀10次,室温放置5分钟(如果室内温度较低时.需放置25C水浴温育),再加入200uL无水乙醇,颠倒混匀10秒;若样品浑浊则先12000转/分钟离心1分钟处理,取上清液,以避免堵塞柱子;

        2、 将液体转入套有收集管的吸附柱中, 12000rpm离心1分钟:

        3、 弃收集管液体,向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm离心1分钟;

        4、 弃收集管液体,向吸附柱中加600uL洗液II, 12000 rpm离心I分钟;

        5、 弃收集管液体,12000 rpm离心2分钟,以彻底去除残留洗液;

        6、将吸附柱转入新的无核酸酸1.5mLEP管(长臂型)中,向柱中央滴加50 uL洗脱液,静置1分钟, 12000 rpm离心1分钟,EP管中液体即为病毒DNA。

        【注意事项】

        1、 实验前诺仔细阅读本试剂盒说明书,严格按照操作步骤执行.在操作过程中对时间、试剂体积等 粘确控制可以获得好的结果。

        2, 样本应新鲜采集使用,或低温运输储存;

        3, 样本具有潜在感染风险,核酸的提取应在核酸提取实验室的生物安全柜中进行。

        4、 核酸提取冇关耗材确保高温灭菌,提取后核酸尽快进入下一步试验或冷冻保存待用。

        5, 试剂使用前应混合均匀,试剂具有一定腐蚀性,使用时请戴手套、口罩做好防护。

        6. 低温下裂解液出现结晶数属正常现象,可在60°C水浴加热助溶后使用。

        7、 实验产生的废弃物应及时收集,远离PCR实验室进行无害化处理。

        仅供兽医诊断使用

       

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